Opis:

Wykorzystując mapowanie peptydów, można zidentyfikować subtelne zmiany podstawowej struktury białka lub przeciwciała, które mogą mieć wpływ na aktywność białka lub jego powinowactwo wiążące.Mapowanie peptydów metodą LC-MS/MS jest jednym z najsilniejszych badań jakościowych potwierdzających pierwotną sekwencję białek lub przeciwciał.Usługa ta może być wykorzystana do porównania różnych partii tych samych białek, przeciwciał lub biopodobników.

Usługa analizy mapowania peptydów przez LC-MS/MS obejmuje:

• Przeciwciało/białko jest denaturowane, redukowane i trawione enzymem proteolitycznym, takim jak LysC lub trypsyna.
• Opcjonalnie: do zwiększenia pokrycia sekwencji białka stosuje się drugi enzym proteolityczny.
• Powstałe mieszaniny peptydów są oddzielone na HPLC z odwróconą fazą.
• Po separacji HPLC dalsza analiza jest wykonywana za pomocą spektrometrii masowej o wysokiej rozdzielczości (Thermo Fisher Orbitrap Velos lub Fusion).
• W celu porównania z białkiem referencyjnym generowana jest mapa peptydowa białka.
• Szczyty są analizowane do sekwencji pierwotnej.
• Opcjonalnie (dwie lub więcej próbek): przeprowadza się ocenę porównywalności w celu oceny różnic między partiami białek lub w celu porównania biopodobników.

Informacje do dostarczenia:

• Potwierdzenie sekwencji pierwotnych (osiągnięcie sekwencji: 60-90% przy użyciu jednego enzymu; > 98% przy użyciu dwóch lub więcej enzymów).
• Glikoprofilizowanie oligosacharydów związanych z N (heterogeniczność glikoform i przybliżenie zajętości miejsca).
• Identyfikacja i przybliżona ilość PTM, takich jak deamidyzacja, utlenianie,Powstawanie piroglutamatu w okresie N i przetwarzanie Lys w okresie C (można wykryć zmodyfikowaną pozycję aminokwasów i modyfikację w %).
• Ocena podobieństwa między różnymi partiami.
• Ocena porównywalności biopodobnych leków.

Obróbka próbki: denaturacja, redukcja/alkylacja i trawienie enzymatyczne, a następnie LC-MS lub LC-MS/MS.